显微镜的几个概念:分辨率，放大率，最大分辨率，分辨极限 “本文主要介绍有关显微镜的一些重要概念，不论是在科研，还是日常生活当中，这些概念都十分容易混淆。分辨这些概念有助于我们避免误解，更好、更合理地使用显微镜。”
01 分辨率

显微镜分辨率：概念、因素和计算　　在显微镜学中，‘分辨率’一词用于阐述显微镜对细节进行区分的能力。换言之，这是样本内两个能被观察人员或者显微镜摄像头区分的实体点之间的理想的距离。
　　显微镜的分

景深的原理首先什么是景深？
　　对于光学系统而言，由于像差的限制，点物很难成点像，加上衍射受限，会形成一个弥散斑。
　　但幸好，人眼也不够高级。对于照相物镜来说，若照片上各点的弥散斑对

蔡司激光共聚焦荧光显微镜 (八)13、高级功能：ZStack、Tiles、Time Series（该篇目之前的流程每次都要做）
（3）Time Series
1、选择“Time Series”；
2、Duration 设置拍摄要持续的时间，有多个单位可选择，如循环数 Cy

蔡司激光共聚焦荧光显微镜 (七)13、高级功能：ZStack、Tiles、Time Series（该篇目之前的流程每次都要做）
（2）Tiles
在“Tiles”模块下“Tiles”方法代表以当前视野为中心拍摄拼图， 适合样品较大一个视野拍不下时

蔡司激光共聚焦荧光显微镜 (四)10、图像处理
（1）图像下面“Graphics”里面，第一排是比较常用的小工具。

“Graphics”比较常用的小工具
①第一个虚线框的作用是截图，选中区域后点一下鼠标右键，点“Create Subs

蔡司激光共聚焦荧光显微镜 (六)13、高级功能：ZStack、Tiles、Time Series（该篇目之前的流程每次都要做）
（1）ZStack
ZStack 即 3D 成像，有两种模式。主要使用“First / Last”模式，通过上下边界决定 3D 成像的 Z

蔡司激光共聚焦荧光显微镜 (三)7、准备拍摄
（1）Frame Size 分辨率：图像越大，分辨率提高，但扫描时间越长。
一般杂志要求是 1k*1k 左右，即“1024*1024”，更高 2048 或 4096，或者直接用“Optimal”系统认为最佳分辨

蔡司激光共聚焦荧光显微镜 (五)11、导出能发表文章的格式
· 软件左上方“File”的“Export / Import”导出或导入的“Export”，界面自动跳到图像处理“Processing”这个界面，且自动在“Method”里面选到“I

蔡司激光共聚焦荧光显微镜 (二)6、每一个通道进行预览，然后调节相应参数
（1）先选中一个通道，例如“mCherry"，再点击左上角“Live”图像预览；
（2）可以通过鼠标双击的方式进行调焦或者调节视野位置。
· 比如把靠上

蔡司激光共聚焦荧光显微镜 (一)普通显微镜成像与共聚焦显微镜成像？

普通显微镜成像

共聚焦显微镜成像

1、开机顺序：1→2→3→4→5→6→7
①②——控制器，通电电源
③——激光器开关（转动钥匙）
④——汞灯电

共聚焦显微镜针孔效应共聚焦显微镜针孔效应
　　在操作共聚焦显微镜，或在讨论这种装置的特性和参数时，我们不可避免地提到针孔及其直径。这篇简短的文章是针对那些没有足够时间钻研共聚焦显微镜的

显微镜的光源　　电光源显微镜的照明光源，主要有卤素灯（halogen lamp）、汞灯（mercury vapor arcdischarge lamp）、氙灯（xenon short arc plasma lamp）和发光二极管（lightemitting diodes，LED）等类

衍射极限、MTF与像素大小(2)一、线对越多，MTF越高，镜头就越好吗？
　　现在来说说第二个问题吧。假设有两个镜头，一个到30lp/mm时，MTF就降到了0.5；而另一个直到60 lp/mm时，MTF才降到0.5。那可不可以说后一个镜

衍射极限、MTF与像素大小(1)　　关于衍射极限、MTF以及像素大小的问题一直是我的一块心病。说完全不了解，又大概知道这么一回事；可真正要我来讲，却又不能严密而系统地跟别人解释清楚。仿佛就如同梦境里的

艾里斑半径公式　　sinθ≈Δθ=1.22λ/d。
　　艾里斑是点光源通过衍射受限成像时，由于衍射而在焦点处形成的光斑。中央是明亮的圆斑，周围有一组较弱的明暗相间的同心环状条纹，把其中以第一

视觉系统精度的极限 艾里斑(airy spot)　　光穿过任何尺寸的孔径时（每个镜头都具有限定的孔径），都会产生衍射由此产生的衍射图案（中心是一块明亮区域，周围是一系列亮度不断降低的同心圆环）被称为艾里斑。


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